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纽蛋白试剂盒操作流程的介绍

日期:2022-09-21 03:51
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摘要:
纽蛋白试剂盒操作流程如下:

   (1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个X对照孔,加入纯细胞裂解液100μl?!?br>
   (2)酶标板置4℃,包被过夜。

   (3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

   (4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及X孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl?!?br>
   (5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min?!?br>
   (6)洗板,同(4)?!?br>
   (7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl?!?br>
   (8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min?!?br>
   (9)洗板,同(4)?!?br>
   (10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min?!?br>
   (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应?!?br>
   (12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,X终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

   (13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

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